人轉化生長因子β1試劑盒的實驗步驟介紹

　　人轉化生長因子β1是由391個氨基酸組成的一個TGF-β1前體分子，可被蛋白水解酶分解成多個肽片斷和一個112個氨基酸的亞單位，TGF-β1前體分子包括無活性相關肽(latency-associatedpeptide,LAP)及活性TGF-β1:LAP是一個二聚肽，位于TGF-β1前體分子的N-末端;活性TGF-β1，是一個25Kd的二聚體蛋白質，由二個亞單位以二硫鍵相鏈接，位于TGF-β1的C-末端；LAP非共價性包繞TGF-β1。在體內，TGF-β1通常以無活性TGF-β1形式存在，無活性TGF-β1是一個分子量>225Kd的復合物，主要成份為一個分子量為125-210Kd的具有多個結構域的糖蛋白,稱之為TGF-β1結合蛋白。

　　人轉化生長因子β1試劑盒的實驗步驟：

　　使用前應將試劑盒的所有組分和待檢樣本溫度恢復到室溫。強烈建議所有的標準品和待檢樣本進行雙復孔測定。

　　1．按前述試劑準備項準備好各種試劑、標準品和待測樣本。

　　2．計算檢測樣本所需酶標條，將酶標條從鋁箔袋取出，剩余的酶標條放回鋁箔袋中并封好袋口，低溫保存。

　　3．洗板：用1×洗滌緩沖液(300μL/孔)洗板三次，拍干酶標板。洗板對試驗結果有重要影響，確保最后一次拍板沒有洗液殘留。

　　4．樣本孵育：加入標準品和待測樣本，100μL/孔，確保15分鐘內完成點樣，室溫孵育2小時。

　　5．洗板：棄去孔中液體，加入1×洗滌緩沖液(300μL/孔)洗板三次，拍干酶標板。

　　6．酶標檢測抗體孵育：將預先配制至工作濃度的檢測抗體加入酶標板中，100μL/孔，混勻，室溫孵育1小時。

　　7．洗板：棄去孔中液體，加入1×洗滌緩沖液(300μL/孔)洗板三次，拍干酶標板。

　　8．顯色：將預先配制的底物液加入酶標板中，200μL/孔，混勻，室溫避光孵育20分鐘。

　　9．終止：加入50μL/孔終止液至酶標板中，輕輕震動酶標板至顯色均勻。

　　10．讀值：20分鐘內讀取450nm的光吸收值。